硫酸多黏菌素B 多肽類抗生素

本品為多黏菌素B的硫酸鹽，按干燥品計算，每1mg的效價不得少于6500多黏菌素B單位。

【性狀】

本品為白色或類白色粉末；幾乎無臭；有引濕性。

本品在水中易溶，在乙醇中微溶。

比旋度　取本品，精密稱定，加水溶解並定量稀釋制成每1ml中約含20mg的溶液，依法測定（通則0621），比旋度為－78°至－90°。

【鑑別】

（1）照薄層色譜法（通則0502）試驗。

供試品溶液　取本品5mg，加鹽酸溶液（1→2）1ml，置安瓿中，熔封，在135℃加熱5小時，開啓安瓿，內容物移至蒸發皿中，置水浴中蒸干，並繼續加熱至鹽酸的氣味完全消失，殘渣加水0.5ml使溶解。

對照品溶液（1）　取亮氨酸對照品，加水制成每1ml中含2mg的溶液。

對照品溶液（2）　取蘇氨酸對照品，加水制成每1ml中含2mg的溶液。

對照品溶液（3）　取苯丙氨酸對照品，加水制成每1ml中含2mg的溶液。

對照品溶液（4）　取絲氨酸對照品，加水制成每1ml中含2mg的溶液。

色譜條件　採用硅膠G薄層板，以苯酚-水（75：25）為展開劑（薄層板先在展開缸中飽和12小時以上）。

測定法　吸取上述五種溶液各5μl，分別點于同一薄層板上，使成條狀，展開，于100～105℃干燥，噴以茚三酮溶液（茚三酮1g溶于乙醇50ml及冰醋酸10ml中），在110℃加熱至條斑顯色清晰。

結果判定　供試品溶液中的條斑應與亮氨酸、蘇氨酸和苯丙氨酸對照品溶液中的條斑位置和顏色相同，在絲氨酸對照品溶液相應的位置應不顯條斑；供試品溶液在近原點上方應顯一條斑。

（2）在多黏菌素B組分項下記錄的色譜圖中，供試品溶液四個主組分峰的保留時間應與標准品溶液四個主組分峰的保留時間一致。

（3）本品的水溶液顯硫酸鹽的鑑別反應（通則0301）。

以上（1）、（2）兩項可選做一項。

【檢查】

酸度　取本品，加水制成每1ml中含20mg的溶液，依法測定（通則0631），pH值應為5.0～7.0。

溶液的澄清度與顏色　取本品5份，分別加水制成每1ml中含50 000單位的溶液，溶液應澄清無色（通則0902第一法和通則0901第一法）。

硫酸鹽　取本品約0.250g，精密稱定，加水100ml使溶解，用濃氨溶液調節pH值至11，精密加氯化鋇滴定液（0.1mol/L）10ml及酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05mol/L）滴定，注意保持滴定過程中的pH值為11，滴定至紫色開始消褪，加乙醇50ml，繼續滴定至紫藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml氯化鋇滴定液（0.1mol/L）相當于9.606mg硫酸鹽（SO₄）。本品含硫酸鹽按無水物計算應為15.5%～17.5%。

有關物質　照高效液相色譜法（通則0512）測定。

供試品溶液　取本品50mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水-乙腈（80：20）溶解並定量稀釋至刻度，搖勻。

標准品溶液（1）　精密稱取多黏菌素B標准品50mg，置100ml量瓶中，加水-乙腈（80：20）溶解並定量稀釋至刻度，搖勻。

標准品溶液（2）　精密量取標准品溶液（1）1ml，置100ml量瓶中，用水-乙腈（80：20）稀釋至刻度，搖勻。

色譜條件　用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以硫酸鈉溶液（取4.46g無水硫酸鈉溶解在900ml水中，用稀磷酸調節pH值至2.3后用水稀釋至1000ml）-乙腈（80：20）為流動相；柱温為30℃；檢測波長為215nm；進樣體積20μl。

系統適用性要求　標准品溶液（1）色譜圖中，多黏菌素B₁峰的保留時間約為35分鍾，多黏菌素B₂、多黏菌素B₃、多黏菌素B₁-I與多黏菌素B₁的相對保留時間分別約為0.5、0.55、0.8與1.0。多黏菌素B₂峰和多黏菌素B₃峰間的分離度應不小于3.0。

測定法　精密量取供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至最大組分多黏菌素B₁峰保留時間的1.4倍。

限度　供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，按面積歸一化法計算，單個雜質不得過3.0%，雜質總量不得過17.0%，小于標准品溶液（2）主峰面積0.7倍的峰忽略不計。

苯丙氨酸　照紫外-可見分光光度法（通則0401）測定。

供試品溶液　取本品約0.375g，精密稱定，置100ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解並稀釋至刻度，搖勻。

測定法　取供試品溶液，在264nm（A₂₆₄）、258nm（A₂₅₈）、252nm（A₂₅₂）、280nm（A₂₈₀）與300nm（A₃₀₀）的波長處分別測定吸光度。按下式計算硫酸多黏菌素B中苯丙氨酸的百分含量（%）：

（9.4787/W）（A₂₅₈－0.5A₂₅₂+0.5A₂₆₄－1.84A₂₈₀+0.8A₃₀₀）

式中　W為硫酸多黏菌素B供試品的重量（g）。

限度　按干燥品計算，含苯丙氨酸應為9.0%～12.0%。

干燥失重　取本品，以五氧化二磷為干燥劑，在60℃減壓干燥3小時，減失重量不得過6.0%（通則0831）。

熾灼殘渣　取本品1.0g，依法檢查（通則0841），遺留殘渣不得過0.75%。

重金屬　取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，依法檢查（通則0821第二法），含重金屬不得過百萬分之二十。

多黏菌素B組分　照高效液相色譜法（通則0512）測定。供試品溶液、標准品溶液（1）、色譜條件與系統適用性要求　見有關物質項下。

測定法　精密量取上述兩種溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至最大組分多黏菌素B₁峰保留時間的1.4倍。

限度　按外標法以相應峰面積計算，按干燥品計，多黏菌素B₃的含量不得過6.0%，多黏菌素B₁-I的含量不得過15.0%，多黏菌素B₁、B₂、B₃和B₁-I的總含量不得少于80%。

可見異物　取本品5份，分別加微粒檢查用水溶解，依法檢查（通則0904），應符合規定。（供無菌分裝用）

不溶性微粒　取本品，加微粒檢查用水溶解，依法檢查（通則0903），每1g樣品中，含10μm及10μm以上的微粒不得過6000粒，含25μm及25μm以上的微粒不得過600粒。（供無菌分裝用）

熱原　取本品，加滅菌注射用水制成每1ml中含2萬單位的溶液，依法檢查（通則1142），劑量按家兔體重每1kg注射1ml，應符合規定。（供注射用）

無菌　取本品，用適宜溶劑溶解並稀釋后，經薄膜過濾法處理，依法檢查（通則1101），應符合規定。（供無菌分裝用）

【含量測定】

精密稱取本品適量，加滅菌水溶解並定量稀釋制成每1ml中約含1萬單位的溶液，照抗生素微生物檢定法（通則1201）測定。1萬多黏菌素B單位相當于1mg多黏菌素B。

【類別】

多肽類抗生素。

【貯藏】

遮光，嚴封，在干燥處保存。

【制劑】

注射用硫酸多黏菌素B