普魯卡因青黴素 β -內酰胺類抗生素，青黴素

C₁₃H₂₀N₂O₂·C₁₆H₁₈N₂O₄S·H₂O 588.72

本品為對氨基苯甲酸2-（二乙氨基）乙酯（6R）-6-（2-苯基乙酰氨基）青黴烷酸鹽一水合物。按無水物計算，含普魯卡因（C₁₃H₂₀N₂O₂）應為38.0%～43.0%，含青黴素（C₁₆H₁₈N₂O₄S）應為56.2%～59.6%，每1mg含青黴素應不少于1000單位。

【性狀】

本品為白色結晶性粉末；遇酸、鹼或氧化劑等即迅速失效。

本品在甲醇中易溶，在乙醇中略溶，在水中微溶。

比旋度　取本品，精密稱定，加水-丙酮（2：3）溶液溶解並定量稀釋制成每1ml中約含10mg的溶液，依法測定（通則0621），比旋度為+165°至+180°。

【鑑別】

（1）照薄層色譜法（通則0502）試驗。

溶劑　丙酮-水（2：3）。

供試品溶液　取本品適量，加溶劑溶解並稀釋制成每1ml中約含5mg的溶液。

對照品溶液（1）　取鹽酸普魯卡因對照品適量，加溶劑溶解並稀釋制成每1ml中約含2mg的溶液。

對照品溶液（2）　取青黴素對照品適量，加溶劑溶解並稀釋制成每1ml中約含3mg的溶液。

色譜條件　採用硅膠G薄層板，以丙酮-15.4%醋酸銨溶液（2：3）（用濃氨溶液或冰醋酸調節pH值至7）為展開劑。

測定法　吸取供試品溶液、對照品溶液（1）與對照品溶液（2）各5μl，分別點于同一薄層板上，展開，晾干，置碘蒸氣中顯色。

結果判定　供試品溶液所顯兩主斑點的位置和顏色應分別與相應對照品的主斑點的位置和顏色相同。

（2）在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液兩個主峰的保留時間應與對照品溶液兩個主峰的保留時間一致。

（3）本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜（光譜集511圖）一致。

以上（1）、（2）兩項可選做一項。

【檢查】

酸鹼度　取本品，加水制成每1ml中約含60mg的懸浮液，依法測定（通則0631），pH值應為5.0～7.5。

甲醇溶液的澄清度與顏色　取本品5份，各0.30g，分別加甲醇5ml溶解后，溶液應澄清無色；如顯渾濁，與1號濁度標准液（通則0902第一法）比較，均不得更濃；如顯色，與黃色或黃綠色2號標准比色液（通則0901第一法）比較，均不得更深。

有關物質　照高效液相色譜法（通則0512）測定。臨用新制。

供試品溶液　取本品70mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A溶解並稀釋至刻度，搖勻。

對氨基苯甲酸貯備液　取對氨基苯甲酸對照品16.80mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流動相A稀釋至刻度，搖勻。

對照溶液　分別精密量取供試品溶液1ml與對氨基苯甲酸貯備液2ml，置同一100ml量瓶中，用流動相A稀釋至刻度，搖勻。

系統適用性溶液　取青黴素、鹽酸普魯卡因和青黴素系統適用性對照品各適量，加對氨基苯甲酸貯備液溶解並稀釋制成每1ml中分別含0.50mg、0.15mg和0.80mg的混合溶液。

色譜條件　用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以緩衝液（取磷酸二氫鉀14g和40%氫氧化四丁基銨溶液6.5g，溶解于約700ml水中，用1mol/L氫氧化鉀溶液調節pH值至7.0，用水稀釋至1000ml，混勻）-水-乙腈（52：28：20）為流動相A；以上述緩衝液（pH 7.0）-水-乙腈（52：18：30）為流動相B，先以流動相A等度洗脱，待普魯卡因洗脱完畢后立即按下表進行線性梯度洗脱；檢測波長為225nm；進樣體積10μl。

系統適用性要求　系統適用性溶液色譜圖中，青黴素應在25分鍾內洗脱，除青黴素、普魯卡因和對氨基苯甲酸外，應檢出一個較大的青黴素主要雜質，出峰順序為對氨基苯甲酸、普魯卡因、青黴素主要雜質、青黴素。對氨基苯甲酸峰與相鄰雜質峰、普魯卡因峰與青黴素主雜質峰、青黴素峰與相鄰雜質峰間的分離度均應符合要求。

測定法　精密量取供試品溶液與對照溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

限度　供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，對氨基苯甲酸峰面積不得大于對照溶液的對氨基苯甲酸峰面積的0.5倍（0.024%），其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液的青黴素峰面積（1.0%）。

青黴素聚合物　照分子排阻色譜法（通則0514）測定。臨用新制。

供試品溶液　取本品約0.3g，精密稱定，置10ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺2ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻。

對照溶液　取青黴素對照品適量，精密稱定，加水溶解並定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液。

系統適用性溶液（1）　取藍色葡聚糖2000適量，加水溶解並制成每1ml中約含0.1mg的溶液。

系統適用性溶液（2）　取普魯卡因青黴素約0.3g，置10ml量瓶中，先加入N，N-二甲基甲酰胺約2ml使完全溶解，再用0.1mol/L藍色葡聚糖2000溶液稀釋至刻度，搖勻。

色譜條件　用葡聚糖凝膠G-10（40～120μm）為填充劑；玻璃柱內徑1.0～1.4cm，柱長30～40cm；流動相A為pH 7.0的0.03mol/L磷酸鹽緩衝液［0.03mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液（61：39）］，流動相B為水；流速為每分鍾1.5ml；檢測波長為254nm；進樣體積100～200μl。

系統適用性要求　系統適用性溶液（1）分別在以流動相A與流動相B為流動相記錄的色譜圖中，按藍色葡聚糖2000峰計算，理論板數均不低于400，拖尾因子均應小于2.0，藍色葡聚糖2000峰的保留時間比值應在0.93～1.07之間。系統適用性溶液（2）在以流動相A為流動相記錄的色譜圖中，高聚體的峰高與單體和高聚體之間的谷高比應大于2.0。對照溶液色譜圖中主峰與供試品溶液色譜圖中聚合物峰，與相應色譜系統中藍色葡聚糖2000峰的保留時間的比值均應在0.93～1.07之間。以流動相B為流動相，精密量取對照溶液連續進樣5次，峰面積的相對標准偏差應不大于5.0%。

測定法　以流動相A為流動相，精密量取供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以流動相B為流動相，精密量取對照溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

限度　按外標法以青黴素峰面積計算，青黴素聚合物的量不得過青黴素的0.20%。

殘留溶劑　照殘留溶劑測定法（通則0861第二法）測定。內標溶液　稱取丙醇適量，用N，N-二甲基甲酰胺溶解並稀釋制成每1ml中約含3mg的溶液。

供試品溶液　取本品約1.0g，精密稱定，置頂空瓶中，分別精密加入內標溶液1.0ml、N，N-二甲基甲酰胺4.0ml，密封，搖勻。

對照品溶液　取乙酸乙酯和正丁醇適量，精密稱定，加N，N-二甲基甲酰胺定量稀釋制成每1ml中約含乙酸乙酯和正丁醇各0.625mg的溶液。精密量取4.0ml，置頂空瓶中，再精密加入內標溶液1.0ml置同一頂空瓶中，密封。

色譜條件　以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或極性相近）為固定液的毛細管柱為色譜柱；起始温度為90℃，維持14分鍾，繼以每分鍾20℃的速率升至180℃，維持5分鍾；進樣口温度為210℃；檢測器温度為250℃；頂空瓶平衡温度為70℃，平衡時間為30分鍾。

系統適用性要求　對照品溶液色譜圖中，按丙醇、乙酸乙酯和正丁醇順序依次出峰，各色譜峰間的分離度應符合要求。

測定法　取供試品溶液與對照品溶液分別頂空進樣，記錄色譜圖。

限度　按內標法以峰面積比值計算，乙酸乙酯與正丁醇的殘留量均應符合規定。

水分　取本品，照水分測定法（通則0832第一法1）測定，含水分應為2.8%～4.0%。

抽針試驗　取本品1.5g，加水5ml制成混懸液，用裝有號針頭的注射器抽取，應能順利通過，不得阻塞。

細菌內毒素　取本品，依法檢查（通則1143），每1000青黴素單位中含內毒素的量應小于0.10EU。（供注射用）

無菌　取本品，用適宜溶劑使分散均勻，加青黴素酶滅活后，依法檢查（通則1101），應符合規定。（供無菌分裝用）

【含量測定】

照高效液相色譜法（通則0512）測定。

供試品溶液　取本品約70mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相約30ml，超聲使溶解后，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液　取青黴素對照品與鹽酸普魯卡因對照品適量，精密稱定，加流動相溶解並定量稀釋制成每1ml中分別約含青黴素0.8mg與普魯卡因0.54mg的溶液。

系統適用性溶液　取青黴素V對照品適量，加流動相溶解並稀釋制成每1ml中含青黴素V 2.4mg的溶液，將此溶液與對照品溶液以1：3體積比混合。

色譜條件　用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以緩衝液（取磷酸二氫鉀14g和40%氫氧化四丁基銨溶液6.5g溶解于約700ml水中，用1mol/L氫氧化鉀溶液調節pH值至7.0，用水稀釋至1000ml，混勻）-水-乙腈（52：23：25）（用1mol/L氫氧化鉀溶液或10%稀磷酸溶液調節pH值至7.5±0.05）為流動相；檢測波長為235nm；進樣體積10μl。

系統適用性要求　系統適用性溶液色譜圖中，青黴素峰與青黴素V峰間的分離度應大于2.0。

測定法　精密量取供試品溶液與對照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算供試品中C₁₃H₂₀N₂O₂和C₁₆H₁₈N₂O₄S的含量。每1mg的C₁₆H₁₈N₂O₄S相當于1780青黴素單位。

【類別】

β-內酰胺類抗生素，青黴素類。

【貯藏】

嚴封，在干燥處保存。

【制劑】

注射用普魯卡因青黴素